Atividade in vitro e in vivo de compostos bioativos de plantas medicinais e nanopartículas de prata sobre Pythium insidiosum
Date
2020-05-14Metadata
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Pythium insidiosum é o agente etiológico da pitiose. Apesar do avanço das pesquisas, o tratamento desta doença não está completamente estabelecido. Este estudo avaliou a ação antimicrobiana in vitro de compostos bioativos de plantas medicinais e nanopartículas biogênicas de prata (bioAgNP) frente a isolados de P. insidiosum, bem como verificou a ação da nanoemulsão de Melaleuca alternifolia e de bioAgNP no tratamento da pitiose experimental. Os ensaios de suscetibilidade in vitro frente a bioAgNP e aos óleos essenciais de M. alternifolia, Origanum vulgare, Mentha piperita, Eugenia caryophyllata e aos compostos majoritários α- terpineol, carvacrol, mentol e eugenol seguiram o protocolo M38-A2 do CLSI. Foram realizados ensaios de citotoxicidade da bioAgNP sobre células de linhagem RK13. Os danos na ultraestrutura das hifas de P. insidiosum tratadas com esse composto foram verificados através da Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) e Microscopia Eletrônica de Transmitância (MET). Ensaios de toxicidade dérmica para o óleo essencial de M alternifolia foram realizados em 30 ratos Wistar. Para os experimentos in vivo, pitiose foi reproduzida em 15 coelhos, fêmeas, raça Nova Zelândia com 90 dias de idade, sendo divididos em grupos de três animais. O grupo controle foi tratado diariamente e topicamente com uma formulação à base de gel não ionizada e 1 mL de água destilada estéril administrado intralesão a cada 48 horas. No experimento com bioAgNP, três coelhos foram tratados diariamente e topicamente com a formulação em base gel contendo 0,001 mg/L de bioAgNP e os outros três animais receberam 1mL de bioAgNP em solução aquosa na concentração de 0,001mg/mL administrada intralesão a cada 48 horas. No ensaio com nanoemulsão de M. alternifolia, a mesma metodologia foi usada, porém os animais foram tratados com 5g de formulação em base de gel contendo 5mg/mL de nanoemulsão de M. alternifolia e 1mL de solução aquosa de nanoemulsão de M. alternifolia na concentração de 5mg/mL. Os animais foram tratados por 45 dias e a área de lesões subcutâneas foi medida a cada cinco dias. A suscetibilidade in vitro de P. insidiosum (n=38) frente a bioAgNP mostrou CIM50 de 0,24mg/L e CIM90 de 0,47mg/L. O limiar de toxicidade da bioAgNP em célula RK13 foi observado nas concentrações de 0,6 a 5mg/L e 0,3 a 5mg/L em 24 e 48 horas de leitura, respectivamente. Adicionalmente, a análise de MEV evidenciou rugosidades na superfície das hifas de P.insidiosum tratadas com bioAgNP, bem como foi observado que a parede celular apresentava áreas de retração, perda da continuidade, presença de descamação e rompimento em algumas regiões. Na MET não foi possivel diferenciar as estruturas das organelas, bem como a parede celular apresentava-se rarefeita, com as bordas enrugadas e parcialmente rompida. A suscetibilidade de P. insidiosum (n=34) aos óleos essenciais e aos compostos majoritários evidenciou que α- terpineol foi o componente bioativo mais eficaz na inibição do oomiceto. Quando a CIM do composto majoritário e do óleo essencial foram comparadas, observou-se que os compostos bioativos α-terpineol e carvacrol tiveram ação anti-Pythium insidiosum superior aos óleos de M. alternifolia e O. vulgare, sugerindo que esses compostos podem ser responsáveis pela atividade inibitória. O óleo de M. alternifolia não demonstrou toxicidade dérmica. Na terapêutica da pitiose experimental, com exceção dos coelhos tratados com formulação tópica de M. alternifolia, as lesões dos demais grupos tratados diferiram do grupo controle (P<0.05). Observou-se que um animal tratado com a formulação tópica de bioAgNP apresentou cura clínica aos 35 dias de tratamento. Os resultados observados no presente estudo ampliam as perspectivas para o desenvolvimento de novos medicamentos com atividade efetiva no controle da pitiose.