Diferentes métodos de transformação genética de Nicotiana tabacum L. para expressão de proteínas
Abstract
As plantas são um sistema de expressão promissor para a produção de proteínas heterólogas. Estas são uma alternativa atraente por apresentarem algumas vantagens como produção em larga escala, baixo custo de crescimento, produção de proteínas complexas e menor risco de contaminação com patógenos humanos. A produção de proteínas em plantas pode ser realizada de forma transiente ou estável, onde na forma transiente não há a integração do transgene no genoma da planta, já na forma estável ocorre a integração e as modificações são transferidas para as próximas gerações. Desta forma, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a transformação de plantas de Nicotiana tabacum de forma transiente e estável. Para a transformação transiente foi utilizada a técnica de agroinfiltração, contendo Agrobacterium e o vetor pJL TRBO-G, em folhas de tabaco. Foi realizada avaliação 4,5 e 6 dias após a infecção e não foi observada a presença da GFP. Já para a transformação estável foi utilizada a técnica de co-cultivo com Agrobacterium, contendo o vetor pH7WGD2::bvl, e discos foliares de tabaco in vitro. Foi realizada a regeneração das plantas através de organogênese. A análise de PCR revelou uma eficiência de transformação de 0,55% em relação ao total de brotos e, a partir do Western Blot, confirmou-se que 2 plantas estavam expressando a lectina BVL. De acordo com os resultados obtidos, observou-se a necessidade da otimização das técnicas para melhorar a eficiência de ambas as transformações. Quanto às plantas transformadas, análises adicionais devem ser realizadas para elucidar o papel da lectina BVL na fisiologia vegetal e defesa da planta de tabaco.