Utilização da Amplificação Isotérmica Mediada por Loop (LAMP) na detecção de genes de resistência em Enterobactérias produtoras de Carbapenemases
Date
2023-04-14Metadata
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Vários métodos têm sido propostos para identificar genes de resistência em
bactérias multirresistentes. O mais utilizado para detectar a resistência adquirida é a
amplificação do DNA alvo por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR). Em
laboratórios pequenos, a aquisição desse equipamento é cara, muitas vezes
inviabilizando a implementação do método. Assim, métodos alternativos de
genotipagem têm sido propostos, com destaque para a amplificação isotérmica
mediada por loop (LAMP), que apresenta baixo custo operacional e boa
especificidade e sensibilidade para a detecção alternativa de genes de resistência
bacteriana. O presente estudo teve como objetivo estabelecer o uso de LAMP para
detectar o gene blaKPC através da produção de beta-lactamase do tipo
carbapenemase. Setenta e seis amostras de Enterobacteriaceae isoladas de
amostras clínicas de pacientes do Hospital Escola UFPel-Ebserh foram isoladas,
identificadas fenotípicamente e separadas de acordo com seu perfil de resistência. O
marcador de resistência detectado com maior frequência foi a produção de
beta-lactamases de espectro estendido (ESBL), 51,32% (39/76), seguido pela
coprodução de ESBL e carbapenemases, 35,53% (27/76), e carbapenemases
isoladamente, 11,84 % (9/76). Encontramos apenas um caso de coprodução de
KPC+MBL, 1,31% (1/76). As 76 amostras foram analisadas por qPCR para os genes
blaKPC e blaNDM-1, obtendo 47,36% (36/76) de positividade para o gene blaKPC e
18,42% (14/76) para o gene blaNDM-1. Das 36 amostras que testaram positivo para
o gene blaKPC, 25 concordaram com o teste fenotípico e foram usadas para
otimizar os ensaios LAMP. No ensaio LAMP, verificamos a taxa de concordância
substancial de LAMP com qPCR, com o valor do índice Kappa igual a 0,761. A
sensibilidade foi avaliada a partir das mesmas diluições usadas em qPCR. O
resultado da sensibilidade mostrou que o LAMP detectou 1,5 UFC mL-1, dez vezes
mais sensível que o qPCR. Nossos achados indicam que o ensaio LAMP pode ser
utilizado no setor de bacteriologia e confirma as carbapenemases em rotinas e
estudos epidemiológicos.