Avaliação de ROP2 recombinante de Neospora caninum como imunobiológico
Date
2017-04-04Metadata
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Neospora caninum é um parasito intracelular, apicomplexa, uma das principais causas de aborto em bovinos levando a perdas econômicas significativas. A busca pelo controle da neosporose tem motivado amplos estudos, utilizando como alvos, proteínas
recombinantes derivadas de organelas do protozoário, em modelos animais. A inoculação de vacinas de subunidade tem demonstrado que respostas imunes Th1 e Th1/Th2 são protetoras ao desafio, entretanto, ineficientes no bloqueio a infecção fetal. Os objetivos deste estudo foram a expressão de rNcROP2 e sua fusão com LTB, resultando rNcROP2 e rLTB/NcROP2 em Escherichia coli, avaliação a antigenicidade das proteínas produzidas frente a soros de bovinos naturalmente infectados, e
identificação da indução de citocinas produzida quando utilizada como vacina de subunidade em camundongos BALB/c. As proteínas rNcROP2 e rLTB/NcROP2 foram expressas de forma insolúvel, solubilizadas apenas em ureia a 8 M, apresentando um
rendimento de aproximadamente 125 mg/L e 25 mg/L, respectivamente. A conformação adotada pelas duas construções permitiu o reconhecimento de epítoposantigênico. A proteína rNcROP2 usada como diagnóstico em bovinos apresentou sensibilidade e
especificidade de 100% com ponto de corte >0,044. Como imunógenos vacinais, as duas proteínas em doses de 25 µg foram imunogênicas, umavez que estimularam a produção de anticorpos IgG após a segunda dose mantendo-se até 60 dias após
inoculação, principalmente do isotipo IgG1. Na expressão de citocinas utilizando rLTB/NcROP2 observou-se uma reduzida estimulação de citocinas IL-10 e IFN-γ, a inoculação não trouxe aumento significativo de IL-10 e IFN-γ. No entanto a indução de IL-12 e IL-17 teve aumento significativo após a inoculação. As respostas à inoculação de rNcROP2 e rLTB/NcROP2 em nosso estudo sugerem que os alvos são capazes de produzir uma resposta Th1/Th17. Os resultados reportam umaindução significativa de IL-17 por vacinas de subunidade com ROP2, esse efeito sugere ser promissor em estudos de proteção contra N. caninum.