Produção de antígenos de Leptospira interrogans em Pichia pastoris e avaliação do potencial imunoprotetor contra leptospirose
Abstract
Leptospirose é uma doença infecciosa grave causada por espiroquetas patogênicas
do gênero Leptospira, sendo classificada como uma zoonose de ampla distribuição
mundial. Esta doença resulta morbidade e mortalidade em humanos e animais,
justificando a aplicação de estratégias profiláticas. As vacinas atuais contra a
leptospirose são compostas por bactérias inativadas e não estimulam proteção
cruzada. Assim, existe a necessidade de desenvolver uma vacina efetiva. No
presente estudo, as proteínas de membrana externa LigANI e LipL32 foram
utilizadas, pois são apontadas como potenciais vacinógenos. Estas, em sua forma
recombinante, costumam ser expressas em Escherichia coli e, como vacina de
subunidade tem apresentado eficiência variável. Nós descrevemos neste trabalho a
utilização da levedura Pichia pastoris como sistema de expressão alternativo. Os
genes ligANI e lipL32 foram clonados no vetor pPICZαB, que permitiu a expressão
secretória das proteínas em P. pastoris. O rendimento das proteínas neste sistema
foi de 276 mg/L para LigANI e 285 mg/L para LipL32. As proteínas recombinantes
foram glicosiladas e mantiveram-se antigênicas. O potencial imunoprotetor das
proteínas foi avaliado em modelo hamster desafiado com cepa virulenta de L.
interrogans sorovar Copenhageni. Ambas as proteínas induziram altas taxas de
anticorpos (P < 0,001). Os animais imunizados com LigANI e LipL32, utilizando
hidróxido de alumínio como adjuvante, não apresentaram proteção contra o desafio,
mas demonstraram um aumento significativo na sobrevida (P < 0,001). Em
conclusão, a levedura P. pastoris demonstrou ser um eficiente sistema de expressão
heterólogo das proteínas LigANI e LipL32 de L. interrogans. A proteína LigANI
secretada e glicosilada pode ser utilizada no controle da leptospirose, embora
estudos adicionais sejam necessários.