Avaliação de antígenos de Mycobacterium tuberculosis com potencial para uso no diagnóstico da tuberculose
Date
2007-12-07Metadata
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Tuberculose, causada pela bactéria Mycobacterium tuberculosis, é uma das mais graves
doenças infecciosas no mundo, sendo responsável por milhões de mortes. Apesar
do uso da vacinação com M. bovis BCG, o número de novos casos continua elevado.
Métodos imunológicos para diagnóstico de tuberculose são limitados devido à
reação cruzada desencadeada pelo BCG. Novas ferramentas diagnósticas
permitiriam a detecção e tratamento de pacientes infectados antes do
desenvolvimento da doença ativa, necessitando para isso antígenos presentes em
M. tuberculosis, mas ausentes na cepa vacinal. Neste sentido, esse trabalho foi
desenvolvido visando à caracterização das proteínas Rv3402, Rv3404 e Rv3405,
contidas na RD16, região ausente apenas M. bovis BCG Moreau, a cepa vacinal
utilizada no Brasil, mas presente em todas as outras cepas de BCG e em M.
tuberculosis. Os genes rv3402, rv3404 e rv3405 foram obtidos por PCR a partir de M.
tuberculosis H37RV e clonados no vetor pENTR/D/Topo (Gateway System -
Invitrogen) e usados para transformar Escherichia Coli Top10F. A seqüência
codificadora de cada gene foi então transferida para o vetor de expressão pDEST17,
o qual permite a fusão da proteína com uma cauda de histidina, facilitando a sua
purificação. Depois de extraídos e purificados, esses plasmídios foram usados para
transformar E. coli BL21 pLysS. A purificação das proteínas foi realizada através de
cromatografia de afinidade. Camundongos BALB/c foram imunizados com as
proteínas purificadas e o soro obtido destes animais foi utilizado para caracterização
das proteínas por Western blot e ELISA. Foi possível demonstrar que as proteínas
são imunogênicas e que são expressas por M. tuberculosis. As proteínas contidas na
RD16 e avaliadas nesse estudo, foram quantificadas em uma concentração de 0,5
mg.mL-1 para Rv3402 e Rv3404 e 0,2 mg.mL-1 para Rv3405 e foram capazes de
induzir uma resposta imune humoral específica e estatisticamente significativa em
camundongos imunizados, indicando que podem vir a ser utilizadas para o
desenvolvimento de testes de imunodiagnósticos para tuberculose, visando à
diferenciação entre indivíduos vacinados e infectados com o bacilo da tuberculose.