Expressão heteróloga da lectina de Bauhinia forficata Link em Escherichia coli e efeito sobre linhagens celulares tumorais
Fecha
2007-06-01Metadatos
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Lectinas são proteínas ou glicoproteínas de origem não imune com propriedade de
ligação especifíca a carboidratos, capazes de interagir com glicocomponentes
presentes em células de plantas, animais, bactérias e vírus. Essa propriedade faz
das lectinas notáveis marcadores utilizados em estudos histoquímicos, bioquímicos
e na caracterização e diferenciação de células. Plantas leguminosas constituem-se
na maior fonte de lectinas, que possuem atividades biológicas importantes, como
atividade inseticida e antiproliferativa sobre células tumorais. Diante disto, o objetivo
deste trabalho foi desenvolver um sistema de expressão heteróloga para uma lectina
de Bauhinia forficata (rBFL), popularmente conhecida como pata-de-vaca , em E.
coli, com o intuito de elucidar suas características e atividades biológicas. O gene bfl
da lectina foi amplificado por PCR a partir do DNA genômico, e clonado nos vetores
de expressão pQE30 e pET32a(+). A lectina rBFL foi expressa em larga escala pelo
vetor pET32a(+)/bfl em E. coli, na forma insolúvel. A purificação foi realizada por
cromatografia de afinidade em coluna de Ni +2 -Sepharose, com rendimento de 40
mg.L -1 . A seqüência da lectina rBFL e sua especificidade por carboidrato é similar a
de lectinas relacionadas. A lectina rBFL apresenta-se na forma de monômeros e
dímeros, com massa molecular aparente de 44 e 94 kDa, respectivamente, possui
atividade biológica em ensaio de hemaglutinação na presença de cátions divalentes
(Ca +2 and Mn +2 ) e demonstra efeito antiproliferativo sobre as linhagens tumorais
humanas MCF-7 (câncer de mama), HT-29 (câncer de cólon) e HL-60 (leucêmica),
dependendo da concentração utilizada. A rBFL demonstrou efeito inibitório dose-dependente
sobre HT-29, e efeito estimulatório sobre a proliferação da linhagem
MCF-7 em altas concentrações, não induzindo morte celular em nenhuma das
linhagens. Os resultados obtidos neste trabalho acerca da rBFL, nunca antes isolada
ou produzida em sistema heterólogo, motivam a realização de novos ensaios de
caracterização visando possíveis aplicações.